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发布时间:2018-12-17   点击次数:148次

  尺寸排阻色谱柱的尺寸排阻色谱法(sizeexclusionchromatography,SEC),是按分子大小顺序进行分离的一种色谱方法。
被广泛应用于大分子分级,即用来分析大分子物质相对分子质量的分布。
分子筛效应:其固定相为化学惰性多孔物质——凝胶,凝胶具有一定大小的孔穴,体积大的分子不能渗透到孔穴中去而被排阻,较早的淋洗出来;中等体积的分子部分渗透;小分子可完全渗透入内,最后洗出色谱柱。这样,样品分子基本按其分子大小先后排阻,从柱中流出。
尺寸排阻色谱柱特点:
1.保留时间是分子尺寸的函数,有可能提供分子结构的某些信息。2.保留时间短,谱峰窄,易检测,可采用灵敏度较低的检测器。
3.固定相与分子间作用力极弱,趋于零。由于,柱子不能很强保留分子因此柱寿命长。
4.不能分辨分子大小相近的化合物,相对分子质量差别必须大于10%能得以分离。
5.大分子的流程短,移动速度快,先流出色谱柱;小分子的流程长,移动速度慢,后流出色柱;而中等分子居两者之间。
6.生物相容性好,有很高的活性回收率。
尺寸排阻色谱柱类型:
凝胶过滤色谱:用于分析多肽、蛋白质、核酸、多糖等。凝胶的代表是葡萄糖系列;流动相是水
凝胶渗透色谱法:用于分析高聚物的摩尔质量,如:聚乙烯、聚氯乙烯等。
常用的凝胶为交联聚苯乙烯凝胶;流动相是有机溶剂凝胶
定义:指含有大量液体(一般是水)的柔软而富于弹性的物质,它是一种经过交联而具有立体网状结构的多聚体。
分子排阻色潽法对所用的凝胶的基本要求:
a.化学性质惰性,不与溶质发生任何作用,可以反复使用而不改变其色谱性质。
b.尽可能不带电荷以防止发生离子交换作用。c.颗粒大小均匀,机械强度尽可能高。
尺寸排阻色谱柱固定相分类:
按机械强度可分为软性、半刚性和刚性凝胶三类。
软性凝胶如葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶都具有较小的交联结构,其微孔能吸入大量的溶剂,并能溶胀到它们干体的许多倍。它们适用以水溶性溶剂作流动相,一般用于小分子质量物质的分析,不适宜用在高效液相色谱中
半刚性凝胶如高交联度的聚苯乙烯(Styragel)比软性凝胶稍耐压,溶胀性不如软性凝胶。常以有机溶剂作流动相。用于高效液相色谱时,流速不宜大。刚性凝胶如多孔硅胶、多孔玻璃等它们既可用水溶性溶剂又可用有机溶剂作流动相,可在较高压强和较高流速下操作。一般控制压强小于7MPa,流速<1cm3·s-1;否则将影响凝胶孔径,造成不良分离。按化学性质分有机凝胶(均匀凝胶、半均匀凝胶、非均匀凝胶);无机凝胶(非均匀凝胶)。
尺寸排阻色谱柱流动相的选择:
排阻色谱所选用的流动相必须能溶解样品,并必须与凝胶本身非常相似,这样才能润湿凝胶。当采用软性凝胶时,溶剂也必须能溶胀凝胶。
溶剂的粘度要小,因为高粘度溶剂往往限制分子扩散作用而影响分离效果。

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